产品货号：
GL4150
中文名称：
脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)
英文名称：
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量，仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与酸性茚三酮共热发生反应，产生稳定的红色产物，以分光光度计测定520nm处吸光度值，在一定浓度范围内颜色深浅与脯氨酸浓度成正比。
脯氨酸(Proline，Pro)是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，25℃时100g水中可溶162g左右，易潮解不易得结晶，有甜味。脯氨酸与茚三酮溶液共热，生成黄色化合物，一旦进入肽链后，可发生羟基化作用，从而形4-羟脯氨酸，是组成动物胶原蛋白的重要成分，羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中，尤其与细胞壁的形成有关，在正常情况下脯氨酸含量较低，但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等)，常有脯氨酸的明显积累，即积累指数与植物的抗逆性有关，在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。
保存：2～8℃，有效期6个月。
以系列脯氨酸标准(1～7号)浓度(μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸浓度。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量：
相关搜索：脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)，脯氨酸，检测试剂盒，茚三酮
脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与酸性茚三酮共热发生反应，产生稳定的红色产物，以分光光度计测定520nm处吸光度值，在一定浓度范围内颜色深浅与脯氨酸浓度成正比。
脯氨酸(Proline，Pro)是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，25℃时100g水中可溶162g左右，易潮解不易得结晶，有甜味。脯氨酸与茚三酮溶液共热，生成黄色化合物，一旦进入肽链后，可发生羟基化作用，从而形4-羟脯氨酸，是组成动物胶原蛋白的重要成分，羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中，尤其与细胞壁的形成有关，在正常情况下脯氨酸含量较低，但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等)，常有脯氨酸的明显积累，即积累指数与植物的抗逆性有关，在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。
| 组分 | 规格 | 保存 |
| 试剂(A):脯氨酸标准(100μg/mL) | 1mL | 4℃ |
| 试剂(B):PRO Lysis buffer(5×) | 50mL | RT |
| 试剂(C):PRO Assay buffer | 50mL | RT |
| 试剂(D):茚三酮 | 1.3g | RT，避光 |
| 试剂(E):茚三酮稀释液 | 50mL | RT |
保存：2～8℃，有效期6个月。
- 蒸馏水或去离子水、甲苯或二甲苯
- 电子天平、研钵或匀浆器、滤纸或纱布
- 离心机、带螺旋盖的离心管或试管、水浴锅或电热炉
- 分光光度计、比色杯(不宜用塑料的)
- 实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。
- PRO Assay buffer应密闭保存，防止挥发。
- PRO Lysis buffer(5×)、PRO Assay buffer和茚三酮稀释液都有一定腐蚀性，应小心操作。
- 茚三酮显色液配制后可4℃避光保存48h有效。建议尽快使用或用多少配多少。
- 本检测方法，资料中大多建议使用甲苯进行抽提反应后的红色色素，因甲苯管制或不易获得，经我公司对比实验及检测结果发现，二甲苯可有效替代甲苯进行抽提。
- 因甲苯或二甲苯都有一定危害性，使用时应在通风橱中小心抽取，用后应及时盖紧瓶盖，防止挥发。
- 如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。
- 测定时不能使用塑料的酶标条或比色皿，因甲苯或二甲苯等有机溶剂与其反应，使测定结果不准确。
- 所测样本的PRO浓度过高，应用PRO Lysis buffer(1×)稀释样品后重新测定。
- 沸水浴的反应过程中，应使用密封性能好的带螺旋盖子的离心管，防止因密封性不好而导致水分进入；不宜使用扣盖离心管，避免因爆沸使得盖子崩开而导致水分进入；此二种原因都可能导致测定结果不准。
- 沸水浴的反应过程中，人员不应随意接近，防止液体喷出，导致伤人事故的发生。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 配制PRO Lysis buffer(1×)：取1份PRO Lysis buffer(5×)加4份去离子水混匀即成。
- 配制茚三酮显色液:准确称取1.25g茚三酮，溶解于50mL茚三酮稀释液中，70℃加热搅拌至完全溶解(也可用超声助溶)，混匀，即为茚三酮显色液。4℃避光备用，48h有效。
- 茚三酮稀释液具有一定腐蚀性，请小心操作。如果2天内用不完，可以称取一定量的茚三酮，加入茚三酮稀释液使终浓度为2.5%即可。
- 准备样品：
- 植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取0.5g，加入5mL PRO Lysis buffer(1×)后匀浆或研磨，沸水浴10min(期间经常摇动)，混匀，用滤纸或纱布过滤，滤液即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。
- 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于脯氨酸的检测。
- 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PRO Lysis buffer(1×)进行适当匀浆，留取上清即脯氨酸提取液，用于脯氨酸的检测。4℃保存备用，3天有效。
- 高活性样品：如果样品中含有较高浓度的脯氨酸，可以使用PRO Lysis buffer(1×)进行恰当的稀释。
- 植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取0.5g，加入5mL PRO Lysis buffer(1×)后匀浆或研磨，沸水浴10min(期间经常摇动)，混匀，用滤纸或纱布过滤，滤液即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。
- 配制系列脯氨酸标准溶液：取出脯氨酸标准(100μg/mL)恢复至室温后，用去离子水稀释为脯氨酸标准(10μg/mL)，再按下表进行梯度稀释：
加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 7 脯氨酸标准(10μg/mL) 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 蒸馏水 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 脯氨酸浓度(μg/mL) 2 3 4 5 6 7 8 - PRO加样：
- 按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
加入物(mL) 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 1 — — 系列脯氨酸标准(1～7号) — 1 — 脯氨酸提取液 — — 1 PRO Assay buffer 1 1 1 茚三酮显色液 1 1 1 - 混匀，沸水浴30min，溶液呈红色。
- 按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
- PRO测定：迅速冷却加入2～3mL甲苯或二甲苯，振摇30s，静置片刻，取上清液转移至新的离心管或试管，3000r/min离心10min，上清液加入比色杯中，空白管调零，520nm处用分光光度计(1cm光径)测定标准管和测定管的吸光度。
- 加入甲苯或二甲苯的量前后应统一；空白管和标准管不用离心，可直接取上清液测定。
以系列脯氨酸标准(1～7号)浓度(μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸浓度。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量：
- 植物组织样品PRO(μg/g)＝C×VT/W
C＝从标准曲线上查得的脯氨酸浓度(μg/mL)
VT＝脯氨酸提取液总体积(mL)
W＝样品鲜重(g) - 血清、尿液等样品PRO(μg/mL)=C×N
C＝从标准曲线上查得的脯氨酸浓度(μg/mL)
N＝稀释倍数
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